اندازه‌گیری میزان آفلاتوکسین متصل به آلبومین در نمونه سرم با استفاده از روش بهینه شده کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا و آشکارگر فلورسانس
نویسندگان
چکیده
هدف: با توجه به آثار مرگبار آفلاتوکسین ها و بهخصوص آفلاتوکسین b1 بر سلامتی انسان، اندازه گیری آفلاتوکسین متصل به آلبومین، بهعنوان یک شاخص مهم میزان در معرض بودن به آفلاتوکسین ضروری بهنظر می رسد. هدف از این پژوهش، بهینهسازی روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا و آشکارگر فلورسانس بهمنظور اندازه‌گیری این شاخص در خون است. مواد وروشها: در این مطالعه، از نمونه سرم خون سه گروه رت بهعنوان کنترل مثبت (تیمار شده با آفلاتوکسین b1)، کنترل (بدون تیمار خاص) و استاندارد (تیمار شده با میزان معینی آفلاتوکسین b1 نشاندار با تریتیوم) استفاده شد. پس از جداسازی آلبومین از نمونه سرم با استفاده از آمونیوم سولفات و اسید استیک، خلوص آلبومین با الکتروفورز sds-page بررسی و غلظت آن به روش برادفورد اندازه‌گیری شد. سپس آلبومین تحت تأثیر پروناز هیدرولیز شد تا آفلاتوکسین متصل به آلبومین بهصورت آفلاتوکسین- لیزین آزاد شود. سپس آنزیم پروناز و باقیمانده حاصل از هیدرولیز آلبومین توسط استون در سرما رسوب داده و جدا شد. حجم محلول رویی را با دستگاه فریز- درایر تقلیل داده و سپس نمونه تغلیظ شده به دستگاه hplc تزریق و مقدار آفلاتوکسین موجود در آن در مقایسه با نمونه مشابه حاصل از رت های گروه استاندارد، اندازه‌گیری شد. نتایج: با الکتروفورز sds-page، خلوص آلبومین جدا شده اثبات شد و غلظت آن در نمونه های کنترل مثبت، منفی و استاندارد بهترتیب 10، 5/12 و 13 میلیگرم در میلیلیتر بهدست آمد. در روش hplc حداقل میزان تشخیص (detection limit) برای اندازه‌گیری آفلاتوکسین متصل به آلبومین، 20 پیکوگرم در هر میلیگرم آلبومین، اختصاصیت روش، 92 درصد و حساسیت آن، 100 درصد تعیین شد. میانگین میزان آفلاتوکسین متصل به آلبومین در سرم رتهای کنترل مثبت، 10 نانوگرم در هر میلیگرم آلبومین محاسبه شد و تکرارپذیری روش طی بارها تکرار، بسیار خوب ارزیابی شد. نتیجهگیری: در این تحقیق برای اندازه‌گیری آفلاتوکسین متصل به آلبومین به روش hplc تغییراتی در فاز متحرک، درصد حلال ها و زمان هر آزمایش ایجاد شد و همچنین کروماتوگرافی میل ترکیبی قبل از انجام hplc حذف شد. بر این اساس hplc-fluorescence بهعنوان یک روش دقیق، حساس و اختصاصی و با بهینهسازی ایجاد شده با سرعت و سهولت بیشتر، تکرارپذیری بالاتر و هزینه کمتر می تواند برای اندازه‌گیری آفلاتوکسین b1 در سرم استفاده شود.
منابع مشابه
اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملاثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملتعیین میزان آفلاتوکسین M1 در نمونه‌های شیر خام تولیدی استان قزوین به روش الایزا و کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا
چکیده مصرف شیرخام و فرآورده‌های لبنی حاوی سم آفلاتوکسین M1 نگرانی‌های زیادی را در مصرف کنندگان ایجاد کرده است. هدف از این مطالعه، بررسی میزان آفلاتوکسین M1 در شیرخام تولیدی استان قزوین بود. بدین منظور تعداد 170 نمونه شیر خام از تانکرهای حمل شیر کارخانجات لبنی، دامداری های صنعتی، مراکز جمع آوری شیر و سایر مراکز عرضه شیر در فصل زمستان جمع آوری و از نظر میزان سم آفلاتوکسین M1 با استفاده از روش ...
متن کاملتعیین میزان آفلاتوکسین M1 در نمونه‌های شیر خام تولیدی استان قزوین به روش الایزا و کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا
چکیده مصرف شیرخام و فرآورده‌های لبنی حاوی سم آفلاتوکسین M1 نگرانی‌های زیادی را در مصرف کنندگان ایجاد کرده است. هدف از این مطالعه، بررسی میزان آفلاتوکسین M1 در شیرخام تولیدی استان قزوین بود. بدین منظور تعداد 170 نمونه شیر خام از تانکرهای حمل شیر کارخانجات لبنی، دامداری های صنعتی، مراکز جمع آوری شیر و سایر مراکز عرضه شیر در فصل زمستان جمع آوری و از نظر میزان سم آفلاتوکسین M1 با استفاده از روش ...
متن کاملاندازه گیری میزان آفلاتوکسین در زعفران به وسیله کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا و تخلیص با ستون ایمونوافینیتی
در این تحقیق یک روش جهت اندازه‌گیری آفلاتوکسین در زعفران با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا مجهز به آشکارساز فلورسانس ارائه شده است. در این روش آفلاتوکسین با استفاده از متانول 80% استخراج و سپس توسط ستون ایمونوافینیتی تخلیص شد. اندازه‌گیری‌ها در طول موج تحریک 365 و طول موج نشری 445 نانومتر انجام گرفت. حد تشخیص آفلاتوکسین‌های B1، B2، G1و G2</sub...
متن کاملاستاندارد سازی و تعیین میزان سوربات پتاسیم در دوغ به روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا
Background and purpose: According to the confirmed dangerous side effects of chemical preservatives such potassium sorbate in public health and food safety, accurate monitoring of the presence of preservatives in food is necessary. Since, according to Iran national standard, using potassium sorbate in dough as preservative is prohibited, so, this study aimed to investigate the presence of pota...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
پژوهش های آسیب شناسی زیستیجلد ۱۲، شماره ۳، صفحات ۴۱-۴۹
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023